إليسا بنتيجة سيئة؟تابعنا لاختيار لوحة إليسا الصحيحة.
يعد اختيار لوحة ELISA المناسبة هو الخطوة الأولى لتجربة ELISA الناجحة ، لكن الكثير من الناس يتجاهلون ذلك. عندما يقوم الأشخاص بإجراء تجارب ، فإنهم غالبًا ما يفكرون في التجربة نفسها فقط ، لكنهم لا يعرفون أن المنتج غالبًا ما يكون له تأثير كبير على التجربة. سيساهم الاختيار المناسب للمنتجات في نجاح التجربة. عادة ما نأخذ في الاعتبار العوامل التالية عند إجراء تجارب ELISA:
1. شكل القاع
في الوقت الحاضر ، يقوم المصنعون بتصميم الآبار التي تحمل علامات الإنزيم كأعمدة مستقلة ، وزيادة المسافة بين الآبار بشكل مناسب بحيث يمكن فصلها بشكل مستقل ، وبالتالي تقليل التلوث المتبادل. أنواع مختلفة من لوحات إليسا لها أشكال مختلفة من قاع البئر. فيما يلي بعض أشكال قاع الفتحات الشائعة:
القاع المسطح: القاع أفقي ، ويسمى أيضًا قاع F. لن ينحرف الضوء من خلال القاع ، والذي يمكنه نقل الضوء إلى أقصى حد. استخدمه للتجارب التي تتطلب قاعًا مستديرًا للرؤية أو لأسباب أخرى.
Round Bottom: يُعرف أيضًا باسم U-bottom ، ويوفر أفضل نتائج التنظيف والأداء الهجين ، وهو مناسب للتطبيقات التي تحتاج إلى اختبار الرواسب.
القاع C: يمكن أن يوفر تأثير تنظيف جيد بين القاع المسطح والقاع المستدير ، مع الجمع بين مزايا القاع المسطح.
قاع المخروط: يُعرف أيضًا باسم V-bottom ، وهو مناسب لأخذ العينات الدقيقة وتخزينها بدقة من أجل الاسترداد الأمثل للأحجام الصغيرة.
2. لون لوحة إليسا
هناك ثلاثة ألوان للوحة إليسا: شفاف ، أسود وأبيض.
تختار غالبية ELISA الألواح الشفافة كمواد تجريبية. تستخدم لوحات إليسا البيضاء والسوداء بشكل عام للكشف عن التلألؤ. تمتص لوحة ELISA السوداء نفسها الضوء ، لذا فإن إشاراتها أضعف من إشارة لوحة ELISA البيضاء. تُستخدم لوحات Elisa السوداء عمومًا لاكتشاف الضوء الأقوى ، مثل الكشف عن التألق ؛ على العكس من ذلك ، يمكن استخدام لوحات Elisa البيضاء للكشف عن الضوء الأضعف ، وغالبًا ما تستخدم في التلألؤ الكيميائي العام وتطوير لون الركيزة (مثل luciferase المزدوج). تحليل الجينات المراسل).
3. مادة لوحة إليسا
المواد الشائعة هي البولي إيثيلين (PE) والبولي بروبيلين (PP) والبوليسترين (PS) والبولي فينيل كلوريد (PVC) والبولي كربونات (PC).
المواد الأكثر استخدامًا في ELSIA هي البوليسترين والبولي فينيل كلوريد. اللوح الناعم من البولي فينيل كلوريد رقيق ، ويمكن قصه ، وسعره منخفض. العيب هو أن النهاية ليست جيدة مثل لوح البوليسترين ، وأن قاع الفتحة ليس مسطحًا مثل البوليسترين. لكن قيمة الخلفية المقابلة ستزيد أيضًا. عادة ، يتم إجراء معالجة التطعيم الأيوني على سطح لوحة ELISA ، ويتم إدخال مجموعات وظيفية نشطة مثل مجموعات الألدهيد ، والمجموعات الأمينية ، ومجموعات الإبوكسي في سطح البوليمر لتحسين أداء سطح الركيزة.
4. آليات ربط مختلفة
يعد الربط الفعال لمواد الطلاء بالسطح السفلي للوحة خطوة حاسمة في ELISA. لذلك ، يجب تحليل الخصائص الهيكلية والخصائص الكيميائية للمادة المراد طلائها بعناية قبل التجربة لاختيار لوحة إليسا المناسبة. بشكل عام ، هناك عدة طرق لربط مادة الطلاء بأسفل اللوحة: الامتزاز السلبي ، الربط التساهمي والتقاط التقارب.
الامتزاز السلبي: آلية الامتزاز السلبي معقدة ، ويعتمد الارتباط بين مادة الطلاء وقاع اللوحة بشكل أساسي على القوى بين الجزيئات (قوة فان دير فال) والروابط الهيدروجينية. في معظم ELISA ، يتم ربط مادة الطلاء بأسفل اللوحة عن طريق الامتزاز السلبي. بشكل عام ، يتم تحقيق الارتباط بين مستضدات الوزن الجزيئي المتوسط والكبير (أو الأجسام المضادة) وقاع اللوحة عن طريق الامتزاز السلبي. غالبًا ما تؤخذ الخصائص الكارهة للماء / المحبة للماء للسطح السفلي للصفيحة في الاعتبار عند اختيار لوحة إليسا. يسرد الجدول التالي نطاق تطبيق واستخدام أسطح الركيزة المختلفة للماء:
محبة للماء | الأولوية الملزمة | الاستخدام الرئيسي |
- | الجزيئات التي تحتوي على مناطق كبيرة كارهة للماء ، مثل: الدهون ، والبروتينات الدهنية ، والبروتينات الكبيرة | أنتيجين إليسا ، فلوريدا ، ليا |
زائد | الجزيئات الحيوية ذات الخصائص المحبة للماء / كارهة للماء مثل: البروتينات المتوسطة إلى الكبيرة ، الغلوبولين المناعي ، الألبومين | ساندويتش الأجسام المضادة المزدوجة ELISA ، Antigen ELISA |
زائد زائد | الجزيئات الحيوية ذات الخصائص المحبة للماء / كارهة للماء مثل: البروتينات الصغيرة إلى الكبيرة ، الغلوبولين المناعي ، الألبومين ، LPS ، البروتينات الفسفورية ، البروتينات السكرية | الأجسام المضادة المزدوجة ELISA ، FIA ، LIA |
plus plus plus | البروتينات السكرية ، جزيئات الدهون القطبية ، الدهون الفوسفورية ، شحميات القلب | مستضد إليسا |
التقاط التقارب: يعتمد التقاط التقارب على الارتباط المحدد للجزيئات الكبيرة المسمى بمستقبلاتها المقابلة. يمكن الحصول على الجزيئات الكبيرة ذات العلامات إما عن طريق الاقتران الكيميائي أو عن طريق الهندسة الوراثية.
ميزات التقاط التقارب هي:
1. عالية الخصوصية
2. يمكن تحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء لنتائج القياس
الأسطح السفلية الأكثر شيوعًا هي: الستربتافيدين (الستربتافيدين) السطح المطلي ؛ سطح مطلي بالنيكل (نيكل تشيلات) وسطح مغطى بالجلوتاثيون (الجلوتاثيون ، GSH).
3. سطح الستربتافيدين: يتم استخدام التقارب العالي والخصوصية للستربتافيدين والبيوتين لتحقيق ارتباط الصفيحة السفلية بالبروتين المطلي.
4. سطح مخلّب النيكل: يتم توصيل مخلّب النيكل بسطح البوليمر لربط بروتينات الاندماج بعلامات (الهيستيدين) الخاصة به.
5. سطح الجلوتاثيون: استخدام الإنزيم وخصوصية الركيزة بين الجلوتاثيون والجلوتاثيون سلفهيدريل ترانسفيراز (GST) لتحقيق ارتباط الصفيحة السفلية ببروتين الغلاف.
لماذا تختار لوحة BKMAM Elisa؟
مصنوعة من مادة البوليسترين بنسبة 100٪ ،
مناسبة لثقافة الخلايا الملتصقة ،
قاعدة مسطحة ، سماكة متساوية وحجم موحد لأعمدة التفاعل ،
معقمة مع عبوة فردية ،
جودة عالية مع سعر المصنع.
